在《银魂》中，有多位角色最终牺牲了，包括但不限于德川茂茂、冲田三叶、伊东鸭太郎、佐佐木异三郎和吉田松阳。
德川茂茂是个性单纯且运气不佳的角色，经常被坂田银时等人戏弄，但他心地善良，最后却被自己所信任的忠臣暗杀。冲田三叶是冲田总悟的姐姐，她温柔善良、爱笑，但身体虚弱，最后患病身亡。伊东鸭太郎头脑聪明，被近藤尊称为老师，他的真正愿望只是想要同伴陪在身边，最终为了保护近藤及土方等人，用身体挡住了机枪而牺牲。佐佐木异三郎是巡警组局长，在黑绳岛战役中，为了救开信女和铁之助，他用自己的身体挡住了敌人砍向他们的刀刃，临死前对信女许下了最后的祝愿。吉田松阳是坂田银时、今井信女等人的共同恩师，他特别爱他的学生，对学生的影响也非常大，根据漫画显示，松阳在银时他们十几岁的时候被抓走，几年后被砍头而死。
这些角色的牺牲都给观众留下了深刻的印象，也增添了《银魂》这部作品的悲剧色彩和深度。
