在LC-MS/MS(液相色谱-串联质谱)分析中,图谱主要分为两类:色谱图和质谱图。这两类图谱在解析样品时起着至关重要的作用。
色谱图主要评价母离子在色谱上的表现。其横坐标是时间轴,纵坐标是信号强度。常见的色谱图有以下几种:
Basepeak图:
描述:色谱分离过程中,将每个时间点质谱检测信号最强的肽段的强度值连续描绘得到的图谱。
特点:图中峰多、信号强,说明样品复杂度高且量足。由于样品是蛋白质酶解后的肽段,因此无法直接在Basepeak图上标出鉴定到的蛋白质。
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TIC图(Total Ion Chromatogram,总离子流图):
描述:相比Basepeak图,TIC图是用每个时间点质谱信号强度最高的母离子绘制的图谱,是样品中所有离子的色谱图。
特点:提供了样品中所有离子的整体分离情况。
图片:

XIC图(Extracted Ion Chromatogram,提取离子流色谱图):
描述:为某个特定母离子的色谱图。
特点:XIC图的峰面积可以用于蛋白定量分析。
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质谱图则展示了一级母离子和二级碎片子离子在质谱里的信号表现。其横坐标是质荷比(m/z),纵坐标是信号强度。常见的质谱图有以下几种:
一级质谱图:
描述:一次质谱全扫描内所有母离子的信号分布图。
特点:提供了样品中母离子的整体分布情况。
二级质谱图:
描述:特定母离子在高能碎裂后产生的二级离子的信号分布图。
特点:通过二级质谱图,可以进一步了解母离子的结构信息。
图片(原始二级质谱图):

B,y离子匹配图(有注释信息的二级质谱图):
描述:将实际检测到的二级离子的质荷比分布与肽段序列断裂后理论形成的子离子匹配后的图谱。
特点:通过匹配,可以确定肽段的序列,以及可能的修饰位点。
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在B,y离子匹配图中,肽段在能量作用下断裂后会生成b离子和y离子对。通过比较实际检测到的离子与理论生成的离子,可以确定肽段的序列和修饰位点。例如,如果某个肽段的b3离子携带了额外的修饰集团,且该修饰集团的分子量与已知修饰集团的分子量相符,则可以推断出该肽段的特定氨基酸上发生了修饰。
综上所述,色谱图和质谱图在LC-MS/MS分析中各自扮演着重要的角色,它们共同提供了样品分子的详细分离和结构信息。
